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Roche_Light Cycler 480II熒光定量PCR儀主要應(yīng)用于哪里?
更新時間:2019-07-22   點擊次數(shù):1865次
   Roche_Light Cycler 480II熒光定量PCR儀主要應(yīng)用于哪里?
  熒光定量檢測系統(tǒng)由熒光定量PCR儀,實時熒光定量試劑,通用電腦,自動分析軟件等構(gòu)成。設(shè)備由熒光定量系統(tǒng)和計算機組成,用來監(jiān)測循環(huán)過程的熒光。
  與實時設(shè)備相連的計算機收集熒光數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)通過開發(fā)的實時分析軟件以圖表的形式顯示。原始數(shù)據(jù)被繪制成熒光強度相對于循環(huán)數(shù)的圖表。原始數(shù)據(jù)收集后可以開始分析。實時設(shè)備的軟件能使收集到的數(shù)據(jù)進行正常化處理來彌補背景熒光的差異。正?;罂梢栽O(shè)定域值水平,這就是分析熒光數(shù)據(jù)的水平。樣品到達域值水平所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)稱為Ct值(限制點的循環(huán)數(shù))。域值應(yīng)設(shè)定在使指數(shù)期的擴增效率為大,這樣可以獲得準確,可重復(fù)性的數(shù)據(jù)。如果同時擴增的還有標有相應(yīng)濃度的標準品,線性回歸分析將產(chǎn)生一條標準曲線,可以用來計算未知樣品的濃度。
  所謂熒光定量PCR儀技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基因,利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
  Roche_Light Cycler 480II熒光定量PCR儀已經(jīng)應(yīng)用于基礎(chǔ)科學研究、臨床診斷、疾病研究及藥物研發(fā)等領(lǐng)域,主要的應(yīng)用在以下方面:
  1.DNA或RNA的定量分析。包括病原微生物或病毒含量的檢測,轉(zhuǎn)基因動植物轉(zhuǎn)基因拷貝數(shù)的檢測,RNAi基因失活率的檢測等。
  2.基因表達差異分析。例如比較經(jīng)過不同處理樣本之間特定基因的表達差異(如藥物處理、物理處理、化學處理等),特定基因在不同時相的表達差異以及cDNA芯片或差顯結(jié)果的確證
  3.基因分型。例如SNP檢測,甲基化檢測等。
  隨著實時Roche_Light Cycler 480II熒光定量PCR儀技術(shù)的推廣和普及,該技術(shù)必然會得到更廣泛的應(yīng)用。
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